鏡檢組織的凍干按下述步驟進行。
(1)凍結軟的動物組織應先用明膠包在組織周圍,采用雙刃刀片切成厚度在1mm以下的薄片,將其放在金屬片上快速投人用液氨冷到一150℃左右的冷風中,瞬間就會凍結,這時試料的冷卻速率約為10℃/min。
(2)于燥在預先冷卻到一50℃以下的試料臺上,移動凍結試料,迅速抽真空排氣開始干燥。干燥過程中,試料的溫度希望低于再結晶或抑制冰晶生長的溫度。但從冰的蒸氣壓來看,在10~3Pa的真空中,溫度在一90℃以下,冰無法升華,即使在一80℃左右,也被認為是極限升華溫度,因此生物組織凍干時一般將制品冷卻到一70℃左右。至于試料溫度和干燥速率的關系,用斯梯芬森圖表示。從該圖可知,隨升華溫度的降低干燥時間急劇增加。
由于干燥的水分是微量的,因此決定干燥終點是困難的。一般是按經驗或者推定來決定干燥的終點。表7-7列出了一些材料的干燥時間參考值。
(3)包埋顯微鏡的標本可不用石蠟包埋,而用于電子顯微鏡的標本需用樹脂包埋。預先將樹脂熔化并排除氣體,而后在其中放入干燥完了的試料。如果包埋劑和試料沒有很好地排氣,在真空中就有起泡的危險。
(4)切片包埋完畢,從真空中取出,再按-一定形式切片、染色,最后進行鏡檢。